Innholdsfortegnelse:

Hvordan velger du kloner?
Hvordan velger du kloner?

Video: Hvordan velger du kloner?

Video: Hvordan velger du kloner?
Video: Klon TEST 2024, November
Anonim

Når velge en klone , vær sikker på at røttene er sterke, hvite og ivrig ut av vekstmediet. Hvis røttene er brune og skrumpet, eller på annen måte virker inaktive, setter du dem tilbake og ser etter en bedre.

Dessuten, hvordan kloner du en enkelt celle?

  1. Tell cellene for å sette ~16 000 celler i den første brønnen (A1) på en 96-brønners plate som inneholder 200 µL medium.
  2. Fjern 100 µL fra A1-holdige celler og bland med B1, pipetter opp og ned 3x for å blande godt før du fjerner 100 µL og blander med C1, etc.

Dessuten, hvordan velger du en pattedyrcellekoloni? Plasser platen under mikroskopet for å velge udifferensiert sunn kolonier . Velg kolonier ved å bruke en P-20 pipette satt til 10 ul. Forsiktig plukke en koloni uten å bryte opp koloni til singel celler , og overfør den til en 96-brønns plate med trypsin. Pipetter opp og ned et par ganger for å spre koloni.

Tilsvarende, hvordan bruker du en klonsylinder?

Ved hjelp av steril medium tang, ta opp en kloningssylinder . Trykk forsiktig på den flate bunnen av sylinder inn i det glatte silikonfettet og fjern med en plutselig vertikal bevegelse. Hvis det gjøres riktig, vil dette gi jevn fordeling av fett på bunnen av sylinder . Sett sylinder over en koloni.

Hvordan velger du kolonier for stabile cellelinjer?

Protokollen for å generere stabile cellelinjer krever flere trinn som vist nedenfor:

  1. Generer en drepekurve for å bestemme den optimale konsentrasjonen av antibiotikum.
  2. Transfekter celler med ønsket plasmidkonstruksjon(er)
  3. Velg og utvid stabile polyklonale kolonier.
  4. Identifiser enkeltkloner ved begrenset fortynning og ekspansjon.

Anbefalt: