Hvordan fungerer Gibson-kloning?
Hvordan fungerer Gibson-kloning?

Video: Hvordan fungerer Gibson-kloning?

Video: Hvordan fungerer Gibson-kloning?
Video: Genteknik del 2 2024, November
Anonim

De Gibson-kloning Master Mix består av tre forskjellige enzymer i en enkelt buffer. Hvert enzym har en spesifikk og unik funksjon for reaksjonen: T5 Exonuclease - skaper enkeltstrengs DNA 3'-overheng ved å tygge tilbake fra DNA 5'-enden. Komplementære DNA-fragmenter kan deretter anneale til hverandre.

Med tanke på dette, hvordan fungerer Gibson?

De Gibson Assembly®-metoden er en kloningsprosedyre som tillater kloning av to eller flere fragmenter uten behov for restriksjonsenzymfordøyelse eller kompatible restriksjonssteder. I stedet er brukerdefinerte overlappende ender inkorporert i fragmentene for å tillate sømløs sammenføyning av tilstøtende fragmenter.

På samme måte, hva er i Gibson Assembly Master Mix? De Gibson Cloning Master Mix består av tre forskjellige enzymer i en enkelt buffer. Hvert enzym har en spesifikk og unik funksjon for reaksjonen: T5 Exonuclease - skaper enkeltstrengs DNA 3'-overheng ved å tygge tilbake fra DNA 5'-enden. Komplementære DNA-fragmenter kan deretter anneale til hverandre.

Hvordan fungerer Golden Gate-montering på denne måten?

Golden Gate kloning eller Golden Gate forsamlingen er en molekylær kloningsmetode som lar en forsker samtidig og retningsbestemt sette sammen flere DNA-fragmenter til et enkelt stykke ved å bruke Type IIs restriksjonsenzymer og T4 DNA-ligase. Dette montering er utført in vitro.

Hvordan fungerer Gateway-kloning?

De GATEWAY Kloning Teknologien er basert på det stedspesifikke rekombinasjonssystemet som brukes av fag l for å integrere sin DNA i E. AttL- og attR-setene som omgir det innsatte fag-DNA-et rekombinerer stedspesifikt under eksisjonshendelsen for å reformere attP-setet i fag l og attB-side i E.

Anbefalt: