Hva skjer hvis du tilsetter for mye restriksjonsenzym?
Hva skjer hvis du tilsetter for mye restriksjonsenzym?

Video: Hva skjer hvis du tilsetter for mye restriksjonsenzym?

Video: Hva skjer hvis du tilsetter for mye restriksjonsenzym?
Video: Пропорции кормления пшеничных заквасок: на что влияют, как рассчитать {КАК УПРАВЛЯТЬ ЗАКВАСКАМИ?} 2024, Desember
Anonim

Ufullstendig fordøyelse kan forekomme når for mye eller også litt enzym benyttes. De tilstedeværelse av forurensninger i de DNA-prøve kan hemme enzymene , noe som også resulterer i ufullstendig fordøyelse. Noen restriksjonsenzymer krever kofaktorer for full aktivitet.

Dessuten, hvorfor tilsettes restriksjonsenzymer sist?

De restriksjonsenzym er vanligvis siste komponent la til til en reaksjon for å sikre at den ikke utsettes for ekstreme forhold. Den sammensatte reaksjonen skal blandes etter enzym addisjon. Bland alle løsninger som inneholder restriksjonsenzymer forsiktig for å unngå enzym inaktivering.

Videre, hvordan kan restriksjonsenzymfordøyelsen forbedres? Bruk ikke mer enn anbefalt enzym mengde (f.eks. 10 enheter av enzym per mikrogram DNA). Reduser mengden av enzym i reaksjonen, om nødvendig. Unngå langvarig inkubasjon av fordøyelse reaksjon. Bruk anbefalt reaksjonsbuffer.

Vet også, hvorfor ville et restriksjonsenzym ikke kutte?

Fremstilling av DNA som skal spaltes bør være fri for forurensninger som fenol, kloroform, alkohol, EDTA, vaskemidler eller for mye salter, som alle kan forstyrre restriksjonsenzym aktivitet. Hvis en hemmer (ofte salt, EDTA eller fenol) er tilstede, vil kontroll-DNA ikke kuttet etter blanding.

Hvorfor kan mengden enzym forårsake stjerneaktivitet?

Stjerneaktivitet er lempelse eller endring av begrensningens spesifisitet enzym mediert spaltning av DNA som kan skje under reaksjonsbetingelser som avviker vesentlig fra de som er optimale for enzym . Stjerneaktivitet kan skje på grunn av tilstedeværelse av Mg2+, som er sett i HindIII, for eksempel.

Anbefalt: