Hva er hensikten med å bruke ddNTP-er?
Hva er hensikten med å bruke ddNTP-er?

Video: Hva er hensikten med å bruke ddNTP-er?

Video: Hva er hensikten med å bruke ddNTP-er?
Video: Hva er risikoen ved å bruke kosttilskudd? #spørforenvenn 2024, November
Anonim

DdNTP refererer til Dideoksynukleotider trifosfater som brukes i Sanger dideoxy-metoden for å produsere forskjellige lengder av DNA-tråder for DNA-sekvensering. Dette resulterer i avslutning av DNA-polymerisasjons-(eller DNA-forlengelses)-prosessen fordi denne prosessen trenger en 3'-OH-gruppe for å fortsette.

Derfor, hvorfor brukes ddNTP-er i sekvensering?

Dideoksynukleotider er kjedeforlengende hemmere av DNA-polymerase, brukt i Sanger-metoden for DNA sekvensering . Dideoksyribonukleotidene har ikke en 3'-hydroksylgruppe, og derfor kan ingen ytterligere kjedeforlengelse forekomme når dette dideoksynukleotidet er på kjeden. Dette kan føre til terminering av DNA sekvens.

På samme måte, kobles ddNTP-er til dNTP-er? En eller flere av dNTP-er er radioaktivt merket for å hjelpe med å visualisere replikasjonsproduktene. Til slutt får hvert rør ett av fire spesielle nukleotider som kalles dideoksynukleotider ( ddNTP-er ). Når imidlertid DNA-polymerase først er inkorporert, kan den ikke utvide kjeden ytterligere fordi den trenger en 3'-OH for å feste til neste nukleotid.

På samme måte kan man spørre seg, hvordan stopper ddNTP-er en sekvenseringsreaksjon?

Når tilstede i små mengder i sekvensere reaksjoner , dideoksyribonukleosidtrifosfater ( ddNTP-er ) avslutte sekvenseringsreaksjon på forskjellige posisjoner i de voksende DNA-trådene. ddNTP-er stopper en sekvenseringsreaksjon fordi de: forårsaker at DNA-polymerase faller av malstrengen. c.

Hvilken teknikk som involverer dideoksynukleotider kan brukes?

Sanger-sekvensering er en metode av DNA-sekvensering basert på selektiv inkorporering av kjedeterminerende dideoksynukleotider av DNA-polymerase under in vitro DNA-replikasjon. Utviklet av Frederick Sanger og kolleger i 1977, var det den mest utbredte brukt sekvensering metode i ca 40 år.

Anbefalt: