Innholdsfortegnelse:

Hvordan setter du inn et gen i et plasmid?
Hvordan setter du inn et gen i et plasmid?

Video: Hvordan setter du inn et gen i et plasmid?

Video: Hvordan setter du inn et gen i et plasmid?
Video: Что такое плазмид? - Плазмиды 101 2024, November
Anonim

De grunnleggende trinnene er:

  1. Klipp opp plasmid og "lim inn" i genet . Denne prosessen er avhengig av restriksjonsenzymer (som kutter DNA) og DNA-ligase (som forbinder DNA).
  2. Sett inn de plasmid inn bakterie.
  3. Vokse opp mange plasmid -bære bakterier og bruke dem som "fabrikker" for å lage proteinet.

Også, hvordan kan et gen settes inn i et plasmid GCSE?

Det er satt inn i et plasmid ved bruk av ligase-enzymer. de plasmid går inn i en bakteriecelle. den transgene bakterien reproduserer, noe som resulterer i millioner av identiske bakterier som produserer humant insulin.

I tillegg, hvordan subkloner du et gen? Grunnleggende trinn for Subkloning Du frigjør og renser innsatsen fra den overordnede vektoren, ligerer denne innsatsen inn i en forberedt målvektor, transformerer denne ligeringsreaksjonen til kompetente bakterieceller. Deretter screener du de transformerte cellene for innsettingen.

Med tanke på dette, hva er de 4 trinnene i genkloning?

I de klassiske restriksjonsenzymfordøyelses- og ligeringskloningsprotokollene involverer kloning av ethvert DNA-fragment i hovedsak fire trinn:

  • isolering av DNA av interesse (eller mål-DNA),
  • ligering,
  • transfeksjon (eller transformasjon), og.
  • en screening/seleksjonsprosedyre.

Hvordan amplifiserer du et plasmid?

Eksperimentell prosedyre

  1. Kjør PCR og rens PCR-produktet: Kjør PCR for å amplifisere det innsatte DNA.
  2. Fordøy ditt DNA:
  3. Isoler innsatsen og vektoren ved gelrensing:
  4. Ligate innsatsen inn i vektoren din:
  5. Transformasjon:
  6. Isoler det ferdige plasmidet:
  7. Bekreft plasmidet ditt ved å sekvensere:

Anbefalt: