Hvorfor ville et restriksjonsenzym ikke kutte?
Hvorfor ville et restriksjonsenzym ikke kutte?

Video: Hvorfor ville et restriksjonsenzym ikke kutte?

Video: Hvorfor ville et restriksjonsenzym ikke kutte?
Video: Why is My Restriction Enzyme Not Cutting DNA? 2024, November
Anonim

Det kan være flere forskjellige grunner til at du restriksjonsenzym kutter ikke DNA som gjennomgått i denne videoen. Fremstilling av DNA som skal spaltes bør være fri for forurensninger som fenol, kloroform, alkohol, EDTA, vaskemidler eller for mye salter, som alle kan forstyrre restriksjonsenzym aktivitet.

I denne forbindelse, hvorfor kutter ikke restriksjonsenzymer bakterielt DNA?

Bakterie ha restriksjonsenzymer , også kalt restriksjonsendonukleaser , hvilken skjære dobbelttrådet DNA på bestemte punkter inn i fragmenter. Interessant nok, restriksjonsenzymer ikke klyv sine egne DNA . Bakterie hindre sine egne DNA fra hogge ned av restriksjonsenzym gjennom metylering av begrensning nettsteder.

Man kan også spørre, hvor kutter restriksjonsenzymer? Restriksjonsenzym Typer Generelt, Type I enzymer kuttet DNA på steder fjernt fra gjenkjennelsessekvensen; Type II skjære DNA innenfor eller nær gjenkjennelsessekvensen; Type III skjære DNA nær gjenkjennelsessekvenser; og type IV spalte metylert DNA.

På samme måte spørs det, hva skjer hvis du tilsetter for mye restriksjonsenzym?

Ufullstendig fordøyelse kan forekomme når for mye eller også litt enzym benyttes. De tilstedeværelse av forurensninger i de DNA-prøve kan hemme enzymene , noe som også resulterer i ufullstendig fordøyelse. Noen restriksjonsenzymer krever kofaktorer for full aktivitet.

Hvorfor fungerer ikke restriksjonssammendraget mitt?

Ufullstendig eller ikke fordøyelse på grunn av enzymaktivitet blokkert av DNA-metylering. Hvis enzymet ditt er aktivt og fordøyer kontrollere DNA og de reaksjon er satt opp med optimale forhold, men du ser fortsatt problemer med fordøyelse , det kan være fordi de enzymet hemmes ved metylering av de mal DNA.

Anbefalt: